環(huán)形-RACE使用一對基因特異性引物進行擴增，提高了PCR擴增的特異性[6]。

1. 環(huán)形RACE是利用T4連接酶將cDNA的末端連接，形成cDNA的環(huán)化結構或串聯(lián)結構；

2. 根據(jù)mRNA上的已知區(qū)域設計特異性引物GSP，以GSP引物合成第二條cDNA鏈；

3. 在未知序列兩端根據(jù)已知序列設計一對GSP進行PCR擴增，將未知序列置換到已知序列中間位置，得到中間是未知序列、兩端是已知序列的擴增產物。

RCA-RACE (rolling circle amplification rapid amplification of cDNA ends)類似于環(huán)形RACE，但是RCA-RACE在環(huán)化的過程中并不會產生串聯(lián)結構，PCR擴增過程中所使用的引物既可以是特異性引物，也可以是隨機引物。PCR擴增使用φ29聚合酶，這種酶的特點是會把酶前行方向上的前鏈從原來的模板鏈上進行解鏈、移開。RCA-RACE利用這種特點，可以讓模板上的每個點在第一輪反應中，都有機會得到n個拷貝，產物呈指數(shù)擴增。

RCA-RACE利用ATP依賴性的熱穩(wěn)定連接酶，將一條cDNA末端的5'磷酸基團和3'羥基連接，形成單分子環(huán)狀DNA。再使用隨機引物或基因特異性引物，在φ29 DNA聚合酶的催化下進行PCR擴增，擴增產物呈指數(shù)增長。

成功率高：經測試RA101陽性率可達到70 %以上

操作流程簡便、體驗感優(yōu)：步驟簡化，一管內完成模板轉換和一鏈cDNA合成；組分Mix形式，減少加樣步驟、降低加樣所帶來的污染

配套RACE引物設計軟件和序列比對軟件：包含RACE實驗引物設計軟件和序列比對軟件，以及使用說明文件，簡化RACE實驗設計環(huán)節(jié)

【參考文獻】

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