分子生物學(xué)實驗中經(jīng)常需要對樣品進(jìn)行濃度和純度的測定，它相當(dāng)于一種質(zhì)控，以此來確保下游實驗的結(jié)果可靠。

常用的DNA濃度/純度測定設(shè)備是紫外分光光度計，它的原理是利用物質(zhì)分子對紫外可見光譜區(qū)的輻射吸收來進(jìn)行分析物質(zhì)成分。

這樣來描述可能有點生硬，我們舉個栗子：

假設(shè)現(xiàn)在有一樣物質(zhì)A，它溶解在溶液內(nèi)，當(dāng)光照射溶液時，溶液內(nèi)的A會吸收一部分的光。不同顏色的光有不同的波長，A對不同顏色的光（不同波長）的吸收程度是不一樣的。

雙鏈的DNA，它能對波長為260nm的光進(jìn)行強(qiáng)烈的吸收，吸收的程度可以用一個叫吸光度的數(shù)值來測量，濃度越高的DNA，理論上吸光度也越高。

最后，通過與標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度數(shù)值對比后，就可以知道未知濃度的DNA有多少量了。

DNA濃度測定通常會使用紫外分光光度計，常見的有NanoDrop這類設(shè)備。除了DNA，它還能測定RNA和蛋白的吸光度。

要提高濃度測定的準(zhǔn)確性，需要注意以下幾點：

• 檢測之前，務(wù)必充分混勻DNA溶液，因為這類機(jī)器的上樣檢測體積只需要1-2uL，如果樣品沒有混勻，那么每次檢測樣品濃度也會不一樣。

• 因為上樣體積很小，所以樣品很容易揮發(fā)，如果把樣品加在檢測基座后不馬上檢測的話，會導(dǎo)致測出來的樣品濃度偏高。

• 實驗環(huán)境和耗材的穩(wěn)定性要高。檢測設(shè)備應(yīng)該在放置在溫度可控、通風(fēng)的環(huán)境下；裝樣品的管子如果不是要進(jìn)行吸取樣品操作的話，需要時刻緊閉。

• 每次檢測完畢，都需要對檢測基座或者比色皿進(jìn)行清洗和擦拭，確保不會有樣品殘留后，再進(jìn)行下一次上樣檢測。

• 空白調(diào)零，應(yīng)該使用溶解待檢測樣品的溶液來調(diào)零。例如如果用水溶解DNA，那就用水調(diào)零，用其他緩沖液溶解，則用對應(yīng)的緩沖液調(diào)零。

在測定后，我們通常會看到，設(shè)備會提供幾個不同的結(jié)果給我們，有的是數(shù)值，例如OD230、OD260，有的是比值，例如OD260:280，那這些結(jié)果代表什么呢？

OD是optical density(光密度)的縮寫,表示被檢測物吸收的光密度。

OD=lg(1/trans)，其中trans為被測物質(zhì)的透光值。

不同的OD以及OD比值，代表不同的意義：

【OD230】

提取核酸時會用到各種化合物，它們以鹽離子的形式存在，例如胍鹽、苯氧基離子、硫氰酸酯。

這些鹽離子對230nm波長的紫外光有強(qiáng)烈的吸收值。如果測定核酸時，發(fā)現(xiàn)OD230數(shù)值很高，代表溶液中的鹽離子濃度很高。

【OD260】

雙鏈DNA在這個波長下會對光有強(qiáng)烈的吸收。

【OD280】

芳香族氨基酸在這個波長下，有強(qiáng)烈的光吸收。如果該數(shù)值很高，代表DNA溶液中可能存在蛋白質(zhì)的污染.

【OD320】

通常是由光散射造成的。如果該數(shù)值很高，意味著溶液內(nèi)有顆粒物污染、待檢器皿例如比色皿有污漬。

【OD260:OD280】

通常用于判斷DNA或RNA溶液的純度。常用的指標(biāo)是：在OD230數(shù)值較低，OD320數(shù)值較低的前提下。較高純度的DNA，比值應(yīng)該為1.7～1.9之間，較高純度的RNA，比值應(yīng)該為1.9～2.0之間。

當(dāng)然，以上測定的結(jié)果并非是絕對計數(shù)的數(shù)值，它是一個參考數(shù)值，因為我們在測定時是不涉及用到標(biāo)準(zhǔn)品這樣?xùn)|西，所以，也就是我們測出來的數(shù)可以作為一定程度的參考。

而且，當(dāng)一些外界因素影響時，測定也會出現(xiàn)偏差，例如樣本含量非常非常低時，測定的數(shù)值誤差就會很高并不具參考意義，設(shè)備耗材出現(xiàn)問題時，測定的數(shù)值也會不準(zhǔn)。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物致力成為推動生命科學(xué)進(jìn)步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、先進(jìn)的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O(shè)在廣東，服務(wù)面向全國。安培生物集進(jìn)口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。

可以在第一時間為用戶提供比較先進(jìn)的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠為廣大用戶提供強(qiáng)大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進(jìn)的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊伍以及專業(yè)的技術(shù)支持，隨時為客戶提供服務(wù)。